Frequency analysis of the g.7081T>G/A and g.10872T>G polymorphisms in the FCGR3A gene (CD16A) using nested PCR and their functional specific effects.

Polymorphic variants p.66L>R/H (g.7081T>G/A; rs10127939) and p.176F>V (g.10872T>G; rs396991) in FCGR3A (CD16A) have been associated with defects in cytotoxic function of natural killer (NK) cells in humans. Genotyping of these variants in genomic DNA has been ambiguous because of high degree of homology between FCGR3A and FCGR3B. We designed a strategy to genotype these polymorphisms and to evaluate their effects on NK cells' cytotoxic activity. One hundred and fifteen individuals from different geographical regions of Colombia were included. Specific primers were designed to amplify FCGR3A exons 4 and 5 encompassing g.7081T>G/A and g.10872T>G by long-range and nested polymerase chain reaction and sequencing. The binding of different monoclonal antibodies to CD16A and NK antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) were evaluated. We demonstrate that amplifying and sequencing FCGR3A allows genotyping of g.7081T>G/A and g.10872T>G without interference from FCGR3B. Allele frequencies in our population were as follows: 7081T = 0.895, 7081G = 0.065, 7081 A = 0.039, 10872T = 0.673, and 10872G = 0.326. We also observed linkage disequilibrium between variants 7081T and 10872G. Interestingly, 176FF variant affected the reactivity of MEM154 monoclonal antibody against CD16A, but it did not affect ADCC. Our studies aimed to determine whether clinical association exists between these polymorphisms and NK cell function defects in patients with compatible phenotypes.

Efectividad y seguridad de la inmunoglobulina humana normal en pacientes con Inmunodeficiencia Primaria / Effectiveness and safety of normal human immunoglobulin in patients with Primary Immunodeficiency

Introducción: los pacientes afectados por una inmunodeficiencia primaria, tienen una carencia o una función disminuida en su sistema de defensas; una de estas carencias es para producir anticuerpos y por eso es indispensable suministrarlos de manera exógena como terapia de reemplazo. En esta evaluación se propone evaluar la efectividad y seguridad de la gammaglobulina o inmunoglobulina humana normal. Objetivo: realizar una revisión, apreciación crítica y síntesis de la evidencia disponible sobre la efectividad y seguridad de la inmunoglobulina humana normal en inmunodeficiencias primarias. Metodología: la evaluación fue realizada de acuerdo con un protocolo definido a priori por el grupo desarrollador. Se realizó una búsqueda sistemática en MEDLINE, EMBASE, Cochrane Database of Systematic Reviews, Database of Abstracts of Reviews of Effects, LILACS y Google, sin restricciones de idioma, fecha de publicación y tipo de estudio. Las búsquedas electrónicas fueron hechas en noviembre de 2014 y se complementaron mediante búsqueda manual en bola de nieve y una consulta con expertos temáticos. La tamización de referencias se realizó por dos revisores de forma independiente y los desacuerdos fueron resueltos por consenso. La selección de estudios fue realizada mediante la revisión en texto completo de las referencias preseleccionadas, verificando los criterios de elegibilidad predefinidos. Las características y hallazgos de los estudios fueron extraídos a partir de las publicaciones originales. Se realizó una síntesis de tipo descriptivo a partir de los estudios observaciones seleccionados. Resultados: se identificaron y tamizaron 99 referencias, para seleccionar 6 e incluir 3, todas ellas estudios observacionales, tipo reporte de series de casos. En estos estudios se define por primera vez el cuadro clínico de las IDP, los mecanismos fisiológicos que son base de la enfermedad y la demostración de la efectividad del suministro de la inmunoglobulina humana normal, pero después de esta demostración inicial de su eficacia no hay estudios que comparen la intervención pues no existe hasta la fecha una alternativa diferente. Se identificaron referencias que evalúan la efectividad comparada entre diferentes presentaciones de la inmunoglobulina humana. Conclusiones: para los pacientes con IDP que afectan la producción de los anticuerpos, la inmunoglobulina humana normal es el único tratamiento de suplencia disponible y por tanto una terapia sustitutiva de elección y esencial.(AU)

Evaluación citogenética y de pérdida de la heterocigosidad de la región 22q11.2 en pacientes con el síndrome de DiGeorge / Cytogenetic evaluation and loss of heterozigocity of chromosome 22q11.2 in patients with the DiGeorge syndrome

Objetivo: evaluar la utilidad de la PCR para marcadores microsatélites (PCR-STR) en la región 22q11.2 en el ADN genómico, para identificar microdeleciones en pacientes con síndrome de DiGeorge (SDG). Materiales y Métodos: se hizo un análisis de las historias clínicas de tres niñas con SDG y se investigaron deleciones en el cromosoma 22q11.2 mediante FISH y PCR-STR. Resultados: la FISH logró detectar deleciones en 22q11.2 en dos de las tres pacientes. Por su parte, por medio de la PCR-STR, se logró establecer que la paciente n.º 1 presentaba una deleción de 1,5 Mb proximal al centrómero, la segunda de mayor frecuencia en los pacientes con SDG. La deleción fue de origen paterno. Para caracterizar el defecto molecular en las otras pacientes, sería necesario acoplar estudios de cromatografía a este método, que permitan determinar el tamaño molecular de cada uno de los alelos parentales, o bien, ampliar este análisis con más microsatélites informativos ubicados en la región 22q11.2 para así definir más precisamente el tamaño de la deleción. Conclusiones: la PCR-STR en el ADN genómico es una alternativa para identificar deleciones que afectan microsatélites en la región 22q11.2 a un menor costo que la FISH y con resultados más rápidos; al mismo tiempo permite definir el origen parental y el tamaño de la microdeleción. Esta información es valiosa para identificar los genes asociados con las características clínicas del síndrome.

Objective: To evaluate the usefulness of PCR for microsatellite markers (PCR-STR) in the 22q11.2 region of the genomic DNA in order to identify microdeletions in patients with the DiGeorge syndrome (DGS). Methodology: Clinical information was obtained from the medical charts of three DGS patients. Deletions in the chromosomic region 22q11.2 were investigated using FISH and PCR-STR. Results: We detected 22q11.2 deletions in two of the patients using FISH. Through PCR-STR, we identified the centromere-proximal 1.5 Mb deletion in patient n.º 1, the second most common defect in DGS. This deletion was of paternal origin. In order to better characterize the molecular defect in the other two patients included in this study, cromatographic analyses should be coupled to the PCR-STR. This would allow more accurate determination of the molecular weight of each parental allele. Also, more microsatellite markers in the 22q11.2 region should be analyzed to better define the deletion size. Conclusions: PCR-STR using the genomic DNA is a good alternative to identify deletions affecting microsatellites in the 22q11.2 region. In comparison to FISH, the PCR-STR is easy to carry out, less expensive and equally reliable in the detection of typical deletions. PCR-STR also allows to determine the parental origin and the deletion size, a valuable information to identify genes associated with the clinical manifestations of this syndrome.